병원균 현장 검사를 위한 시각적 부피측정 방법의 개발
- 발행기관 강릉원주대학교 대학원 화학과
- 발행년도 2019
- 학위수여년월 2020. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 화학과
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/kangnung/000000010594
- UCI I804:42001-000000010594
- 본문언어 한국어
초록/요약 도움말
이 연구에서는 병원성 균의 현장검사를 위한 시각적 부피 측정 분석법이 개발되었다. 이 방법은 자성 입자상에 항체를 고정시켜 제조된 포획 입자 (CP), 실리카 나노 입자상에 catalase 및 항체를 고정시켜 제조한 표지 입자 (LP) 두 종류의 입자를 사용했다. CP- 검체(균) -LP 복합체의 형성 후, 결합 되지 않은 표지입자를 자성을 이용한 분리에 의해 제거하고 복합체와 관련 된 catalase에 의해 발생된 산소기체 발생량을 측정 하였다. 동력원 없이 측 정 과정을 수행하기 위해, 검출 챔버 및 챔버에 연결된 튜브를 포함하는 3 가지 종류의 검출 시스템을 고안하였다. CP- 검체(균) -LP 복합체를 다른 물질로부터 분리하고 주사기 및 자석을 조작함으로써 검출 챔버에서 수집 하였다. 검출된 균의 수는 챔버에 H2O2 기질용액의 첨가로 인한 튜빙안의 기질용액의 움직임에 의해 추정되었다. 이 방법은 간단하고 별도의 측정 장 치 없이 수행되었으며, 102 CFU의 낮은 검출 한계로 S. typhimurium 을 검 출 할 수 있으므로 현장검사에 있어서 병원성 균의 검출이 충분히 적용 될 수 있는 가능성을 확인 하였다.
more초록/요약 도움말
In this study, a visual volumetric assay method for the point-of-care testing of bacterial pathogens was developed. The method utilized two kinds of particles; capture particles (CPs) prepared by immobilizing anti-bacterial antibodies on magnetic particles and labeling particles (LPs) prepared by immobilizing catalase and anti-bacterial antibodies on silica nanoparticles. After formation of CP-bacteria-LP complex, unbound LPs were removed by magnetic separation and a volume of oxygen produced by catalase associated with the complex was estimated. In order to carry out the assay process without power consumption, three kinds of assay system comprising a detection chamber and tubing connected to the chamber were devised. The CP-bacteria-LP complex was separated from other substances and collected in the detection chamber by manipulating syringes and magnets. The number of bacteria was estimated by the movement of dye solution in the tubing caused by addition of H2O2 solution to the chamber. The method was simple and carried without the aid of instruments but allowed detection of S. typhimurium with a lower detection limit of 102 CFU, demonstrating its potential to be applied to point-of-care testing of pathogenic bacteria.
more목차 도움말
Ⅰ. 서론 1
1. Point-of-care testing 1
1) 정의 1
2) 유래 1
3) 유용성 2
4) POCT를 위한 분석 방법 2
⑴ Lateral flow immunoassays 2
⑵ Paper-based analytical devices 3
⑶ Lab-on-a-chip 4
⑷ Lab-in-a-tubing 5
2. 병원균 검출 6
1) 병원균 검출의 중요성 6
2) 병원균 검출 진단법 8
⑴ 선택배지법 8
⑵ Polymerase chain reaction 8
⑶ Enzyme-linked immunosorvent assay 9
3) Salmonella typhimurium 10
3. Catalase 기반 면역 분석법 13
1) Catalase 13
2) 면역분석법 13
Ⅱ. 재료 및 방법 15
1. 재료 15
2. 용액이동에 의한 검출 시스템 16
1) S. typhimurium 균의 배양 조건 17
2) 포획입자 제작 18
⑴ 제작 방법 18
⑵ 항체 결합 확인 18
⑶ 포획 효율 확인 19
3) 표지입자 제작 19
⑴ 제작 방법 19
⑵ 효소 활성 확인 20
⑶ 항체 결합 확인 21
4) 특이성 확인 21
5) S. typhimurium 균 검출 확인 21
3. 입자와 용액이동에 의한 검출 시스템 22
1) Catalase 표준 곡선 23
2) 포획입자 이동효율 측정 24
3) 입자비율 최적화 24
4) S. typhimurium 균 검출 24
4. 입자와 용액 동시이동에 의한 검출 시스템 25
1) LOC 제작 26
2) Catalase 표준곡선 26
3) 표지입자 특이성 확인 27
4) S. typhimurium 균 검출 27
Ⅲ. 결과 28
1. 용액이동에 의한 검출 시스템 28
1) 포획입자 및 표지입자 항체 기능화 확인 28
2) 포획입자 포획효율 29
3) 표지입자 효소활성 30
4) 입자 특이성 확인 30
5) S. typhimurium 균 검출 확인 32
2. 입자와 용액이동에 의한 검출 시스템 33
1) Catalase 표준 곡선 33
2) 포획입자 이동효율 34
3) 입자 비율 최적화 35
4) S. typhimurium 균 검출 확인 36
3. 입자와 용액 동시이동에 의한 검출 시스템 38
1) Catalase 활성 측정 38
2) 표지입자 특이성 확인 39
3) S. typhimurium 균 검출 확인 39
Ⅳ. 결론 41
Ⅴ. 참고문헌 44
