입자를 기반으로 한 비효소적 초고감도 핵산 검출 방법
- 발행기관 강릉원주대학교 일반대학원
- 발행년도 2019
- 학위수여년월 2020. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 화학과
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/kangnung/000000010591
- UCI I804:42001-000000010591
- 본문언어 한국어
초록/요약 도움말
현재의 분자 진단 방법은 PCR 또는 등온 증폭 방법과 같은 효소적 증폭에 기초하 며, 이는 비경제적이며, 고가의 단백질의 사용이 요구되기 때문에 실험 설계 단계 에서의 환경적 요인으로써 취약하다. 본 연구에서는 각각 캡처 올리고뉴클레오티드 (COs)와 표지 올리고뉴클레오티드(LOs)를 고정하여 준비된 포획 입자 (CPs)와 표 지 입자 (LPs) 입자를 사용 하여 효소적 증폭 없이 DNA를 감지하는 간단하고 매 우 민감한 방법을 개발하였다. 각각의 입자는 자성 나노 입자와 유로피움 킬레이트 나노 입자가 사용되었다. 표적 핵산에 대한 CP 및 LP의 결합은 포획 매개 올리고 뉴클레오티드 (CMO) 및 표지 매개 올리고 뉴클레오티드 (LMO)에 의해 매개되었 다. 매개체는 표적에 결합 시, 개방되고 CP 또는 LP의 결합을 위한 서열을 노출시 키는 헤어핀 구조를 가짐으로써 자유 매개체를 제거 할 필요가 없다. 실험 방법으 로는 샘플을 CMO 및 LMO와 혼합하고, 95 ℃로 가열하고, 빙조에서 냉각시키고, 혼합물에 CP 및 LP를 첨가하고, 자기 분리 방법에 의해 CP 및 LP 결합 물질을 분리 하였다. 최종적으로, CP에 결합 된 유로퓸 나노 입자의 형광을 측정하여 표 적 핵산을 결정 하였다. 전체 분석 과정은 1 시간 내에 수행되었고, 1000 copies의 검출 한계로 이중 가닥 DNA를 검출 할 수 있었다. 이 방법은 간단하고 효소 없이 수행되지만 효소 증폭 방법과 비교할만한 감도로 이중 가닥 DNA를 검출 할 수 있 기 때문에, 현장 분자 진단에 적용 할 수 있는 가능성을 보여준다.
more목차 도움말
Ⅰ. 서론 1
1. 분자 진단 1
2. 증폭 방법 2
2-1. 중합 효소 연쇄 반응 3
2-2. 재조합-중합 효소 증폭 반응 4
2-3. 혼성화 연쇄 반응 6
3. 검출 방법 7
3-1. 측면 흐름 분석 8
3-2. 전기화학적 검출 9
3-3. 입자 기반 분자 진단 10
Ⅱ. 재료 및 방법 11
1. 원리 11
1) 직접 검출 방법 11
2) 표지 매개자 이용 검출 방법 12
3) 포획 및 표지 매개자 이용 검출 방법 12
2. Oligonucleotide 합성 14
1) 직접 검출 방법 14
2) 표지 매개자 이용 검출 방법 14
3) 포획 및 표지 매개자 이용 검출 방법 14
3. Oligonucleotide 결합 특이성 확인 15
1) 직접 검출 방법 15
2) 표지 매개자 이용 검출 방법 15
3) 포획 및 표지 매개자 이용 검출 방법 16
4. 입자 제작 및 결합 확인 17
1) 포획 입자 제작 17
2) 표지 입자 제작 18
3) 입자와 결합한 Oligonucleotide 확인 19 (1) 직접 검출, 표지 매개자 이용 검출 방법 19 (2) 포획 및 표지 매개자 이용 검출 방법 19
5. DNA 검출 방법 20
1) 직접 검출 방법 20
2) 표지 매개자 이용 검출 방법 20
3) 포획 및 표지 매개자 이용 검출 방법 21
III. 결과 및 고찰 22
1. Oligonucleotide 결합 특이성 확인 22
1) 직접 검출 방법 22
2) 표지 매개자 이용 검출 방법 23
3) 포획 및 표지 매개자 이용 검출 방법 24
2. 입자에 결합한 Oligonucleotide 확인 25
(1) 직접 검출, 표지 매개자 이용 검출 방법 25 (2) 포획 및 표지 매개자 이용 검출 방법 26
3. DNA 검출 방법 27
1) 직접 검출 방법 27
2) 표지 매개자 이용 검출 방법 28
3) 포획 및 표지 매개자 이용 검출 방법 29
(1) ssDNA 검출 29
(2) dsDNA 검출 30
IV. 결론 33
V. 참고문헌 27
