노랑어리연꽃 추출물의 아토피 피부염 개선효과
The effect of Nymphoides peltata extract on atopic dermatitis
- 주제(키워드) 도움말 아토피피부염 , 노랑어리연꽃 , 노랑어리연꽃 지하부 추출물 , 인터루킨-4 (IL-4) , 면역글로불린 E(IgE) , 피부장벽
- 발행기관 강릉원주대학교 일반대학원
- 지도교수 도움말 손영창, 김수남
- 심사위원 김수남, 손영창, 김진철
- 발행년도 2018
- 학위수여년월 2018. 8
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 도움말 일반대학원 KIST강릉분원학.연협동과정
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/kangnung/000000010282
- UCI I804:42001-000000010282
- 본문언어 한국어
- 저작권 강릉원주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
초록/요약 도움말
국 문 요 약 노랑어리연꽃 추출물의 아토피 피부염 개선효과 아토피 피부염(Atopic dermatitis, AD)은 알레르기 질환으로 피부에 나타나는 알레르기 증상을 말한다. 아토피 피부염은 만성 재발성 피부 질환으로 극심한 소양감과 피부 건조증을 동반하고, 아토피 피부염의 특징적인 모양 및 분포를 가진 피부 병변이 특징이다. 발병 요인은 명확히 밝혀지지 않았지만 현재까지 알려진 주요 요인으로는 유전적 요인, 면역학적 요인, 환경적 요인이 있고, 이러한 여러 요인들의 복합적인 상호작용에 의해 발병되는 것이라고 알려져 있다. 이러한 아토피 피부염을 효과적으로 관리하기 위해선 여러 요인들의 복합적인 상호작용에 대한 포괄적이고 깊이 있는 이해가 필요하다. 알레르기성 면역 반응에 관여하는 랑게르한스 세포(Langerhans cells, LCs)와 염증 수지상 표피 세포(Inflammatory dendritic epidermal cell, IDECs)는 항원을 인식해 naïve T 세포를 TH2 도움 T 세포(TH2 helper T cell, Th2)로 전환시키면서 알레르기성 면역 반응이 시작되며, 이 과정에서 인터루킨-4(Interleukin-4, IL-4)가 면역학적 요인에서 매우 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 따라서 본 연구에서는 스크리닝을 통해 IL-4 감소 효과를 확인한 노랑어리연꽃을 이용하여 아토피 피부염 개선 효과를 검증하고자 하였다. 노랑어리연꽃(행채, Nymphoides peltata) 전초 추출물 및 분획이 염증 조건 하의 RBL-2H3 세포에서 염증관련 사이토카인(Cytokine)인 IL-4의 mRNA와, HaCaT 세포에서 염증관련 케모카인(Chemokine)인 RANTES (Regulated on activation, normal T cell expressed and secreted), MDC (Macrophage-derived chemokine)의 mRNA를 감소시키고, CV-1 세포에서 표피 단백질 분해 효소 억제자인 SPINK5 (Serine protease inhibitor Kazal-type 5)의 전사 활성을 증가시키는 것을 확인하였다. 노랑어리연꽃 지상부, 지하부 추출물로 나누어 처리하였을 때, 노랑어리연꽃 지하부 추출물이 염증 조건 하의 RBL-2H3 세포에서 IL-4의 mRNA를 감소시키는 것을 확인하였고, oxazolone 유도 아토피 피부염 동물 모델에서 노랑어리연꽃 지하부 추출물이 아토피 피부염 증상인 피부 발적, 혈관 확장, 각질 등으로 피부가 두꺼워지는 것을 완화시키고, 혈장 속 IL-4, 면역글로불린 E (Immunoglobulin E, IgE)를 감소시키는 것을 확인하여, 노랑어리연꽃 지하부 추출물이 IL-4와 알레르기성 면역 반응을 저해하는 것을 확인할 수 있었다. 이를 바탕으로 DNCB 유도 아토피 피부염 동물 모델에 노랑어리연꽃 지하부 추출물을 처리하여 oxzolone 모델과 동일한 양상을 확인하였고, 비만 세포의 수가 감소되는 것을 확인하였다. 뿐만 아니라 경표피 수분 손실량(Trans epidermal water loss, TEWL)을 감소시키고 피부 수분 함유량 증가시켰으며, 표피의 단백질 분해 효소인 KLK5 (Kallikrein 5)를 감소시키고 피부 장벽을 구성하는 단백질인 Desmocollin-1, filaggrin을 증가시켜 피부 장벽 기능의 회복에도 도움을 주는 것을 확인할 수 있었다. 위의 결과를 종합하면 노랑어리연꽃 지하부 추출물은 피부 장벽의 기능 회복과 IL-4와 알레르기성 면역 반응을 억제하는 것을 통해 아토피 피부염에 대한 개선 효과를 나타내어 아토피 피부염에 유효한 천연물 치료제가 될 수 있다고 판단된다.
more목차 도움말
목 차
List of Figures Ⅰ
List of Tables Ⅲ
Abbreviations and Symbols Ⅳ
국문요약 VI
Abstract VIII
1. 서 론 1
2. 재료 및 방법 4
2.1 시료 및 추출 4
2.1.1 시료 4
2.1.2 추출 4
2.2 노랑어리연꽃 추출물의 아토피 피부염 개선 효능 검증 : in vitro 5
2.2.1 세포 배양 5
2.2.2 세포 독성 측정 5
2.2.3 RNA 분리 및 RT-PCR (Reverse transcriptase-PCR) 6
2.2.4 Luciferase reporter gene assay 9
2.3 노랑어리연꽃 추출물의 아토피 피부염 개선 효능 검증 : in vivo 10
2.3.1 단회 경구 투여 독성 시험 10
2.3.2 안점막 자극 대체 시험(HET-CAM assay) 10
2.3.3 Oxazolone 유도 아토피 피부염 모델에서 노랑어리연꽃 추출물의 효능 검증 11
2.3.4 DNCB 유도 아토피 피부염 모델에서 노랑어리연꽃 추출물의 효능 검증 13
2.3.5 H&E staining 15
2.3.6 Toluidine blue staining 15
2.3.7 혈액 분석 16
2.3.8 Immunoblotting 16
2.3.9 Immunohistochemistry 17
2.3.10 통계 분석 17
3. 결 과 19
3.1 노랑어리연꽃의 추출 19
3.2 노랑어리연꽃 추출물 및 분획의 아토피 피부염 개선 효능 검증 : in vitro 21
3.2.1 세포 독성 평가 21
3.2.2 IL-4의 mRNA 발현 억제 효과 23
3.2.3 RANTES와 MDC의 mRNA 발현 억제 효과 25
3.2.4 SPINK5의 전사 활성 증가 효과 27
3.2.5 노랑어리연꽃 부위별 추출물의 IL-4의 mRNA 발현 억제 효과 29
3.3 노랑어리연꽃 추출물의 아토피 피부염 개선 효능 검증 : in vivo 31
3.3.1 단회 경구 투여 독성 시험 및 안점막 자극 대체 시험(HET-CAM assay) 31
3.3.2 Oxazolone 유도 아토피 피부염 모델에서의 개선 효과 34
3.3.3 Oxazolone 유도 아토피 피부염 모델에서의 아토피 피부염 관련 인자 분석 37
3.3.4 DNCB 유도 아토피 피부염 모델에서의 개선 효과 39
3.3.5 DNCB 유도 아토피 피부염 모델에서의 피부 장벽 개선 효과 확인 45
3.3.6 DNCB 유도 아토피 피부염 모델에서의 아토피 피부염 관련 인자 분석 49
4. 결론 및 고찰 52
5. 참고문헌 56
